Mutacje w TUBB8 i Meiotic Aresztowanie ludzkiego Oocyte ad

Instytucjonalna komisja rewizyjna Shanghai Medical College of Fudan University zatwierdziła badanie, a uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę. Dodatkowe informacje znajdują się w sekcji Metody w dodatkowym dodatku, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie. Procedury badania
Sekwencjonowaliśmy exomy trzech dotkniętych chorobą kobiet i dwóch kobiet z rodziny 1, wykorzystując technologię Agilent SureSelect Whole Exome oraz technologię sekwencjonowania Illuminy. Wariant uznawano za mutację kandydata, jeśli był obecny u wszystkich trzech dotkniętych chorobą kobiet, był nieobecny w dwóch kontrolach i nie był wcześniej zgłaszany lub miał częstość występowania poniżej 0,1% w wariancie wariantu 1000 genomów, NHLBI. (National Heart, Lung and and Blood Institute) Baza danych projektu Exome Sequencing oraz Exome Aggregation Consortium. Przeprowadziliśmy sekwencjonowanie Sanger z genu kandydata u członków rodzin od do 24 (więcej informacji na ten temat znajduje się w sekcji Metody w dodatkowym dodatku). Testowaliśmy ekspresję genową w oocytach, przewidywaliśmy wpływ potencjalnych mutacji na strukturę białka i testowaliśmy funkcjonalne efekty mutacji in vitro, w komórkach HeLa, w drożdżach oraz w komórkach jajowych u myszy i ludzi (patrz sekcja Metody w Dodatku Dodatek).
Wyniki
TUBB8 i zatrzymanie dojrzewania ludzkiego Oocytu
Rysunek 1. Ryc. 1. Rodowce i status rodzin TUBB8, na które ma wpływ zatrzymanie Oocyte. Pokazane są figury siedmiu rodzin z odziedziczonymi lub de novo mutacjami TUBB8. Kwadraty oznaczają męskich członków rodziny, okręgi członków rodziny płci żeńskiej, stałe symbole dotknięte członkami rodziny i otwarte symbole nienaruszone członków rodziny. Krótkie podwójne linie poziome wskazują, że nie było potomstwa. Strzałki wskazują probandy w rodzinach i 2. Rodzina obejmuje pięć dotkniętych kobiet z przewlekłą pierwotną niepłodnością. Mutacja V229A w TUBB8 została odziedziczona po ojcu każdej chorej kobiety. Członek rodziny IV-2 to 7-letnia dziewczynka niosąca mutację, której nie można ocenić na płodność. Mutacje D417N, M363T, R2K i M300I zidentyfikowano odpowiednio w rodzinach 2, 5, 6 i 7; przekazywanie przez ojca jest ewidentne. Mutacje S176L i R262Q zidentyfikowane w rodzinach 3 i 4 są de novo. Chromatogramy Sanger Sequencing pokazane są w pobliżu rodowodów. W oznacza dziki typ.
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka kliniczna i charakterystyka komórek jajowych pobranych od pacjentów z siedmiu rodzin z mutacjami TUBB8. Rysunek 2. Rycina 2. Phenotypy oocytów z zahamowaniem dojrzewania. Prawidłowy oocyt (panel A) i oocyt z probanda Rodzina (panel B) oddzielono od komórek ziarnistych i zbadano pod mikroskopem świetlnym i polaryzacyjnym. Oocyt o normalnej metafazie II (MII) ma pierwsze ciało polarne (czarna strzałka w panelu A), a normalne komórki miocytów metafazy I (MI) i MII mają widoczne wrzeciona (białe strzałki na panelu A). Wszystkie oocyty od pacjenta znajdują się w MI, a żaden nie ma pierwszego ciała polarnego (panel B) (ryc. S1 w dodatku uzupełniającym). Oocyty u pacjentów z rodziny (panel B) oraz z rodzin 2 i 6 (ryc. S1 w dodatkowym dodatku) nie mają widocznego wrzeciona (nie uzyskano danych dotyczących polaryzacji mikroskopowej dla oocytów od pacjenta z rodziny 3)
[więcej w: długi weekend czerwcowy, bortezomib, naklejka na legitymację ]